从基础明场到荧光成像：奥林巴斯CKX53加装LED荧光模块与高灵敏相机升级路径
——不换整机，分步骤获得GFP、RFP、DAPI荧光观察能力
很多实验室一开始只买了CKX53的明场相差配置，用来做细胞培养日常观察。课题深入后，需要看GFP转染、RFP标记、DAPI染核。这时不必换一台新的荧光显微镜——在CKX53上加装LED荧光模块和合适的相机，就能把设备升级成荧光观察平台。
一、为什么不换整机
CKX53的机身预留了荧光接口，升级属于「加装」而不是「更换」。原有的明场、iPC相差、人体工学观察体验全部保留，只是在光路中增加了荧光激发与滤块。这样预算更省，操作者也不需要重新适应一台新机器。
图16 LED荧光模块
二、LED荧光模块的优势
·即开即亮，无需汞灯预热
·寿命长，长期使用成本低
·发热低，减少对活细胞的热影响
·按通道配置，不盲目堆料
相比传统汞灯，LED光源的这些特点尤其适合细胞房日常做荧光检查：不用预热、不会因为忘记关灯而缩短寿命、发热量小对样品友好。
三、常用通道配置
标记 | 典型实验 | 通道建议 |
DAPI/Hoechst | 细胞核定位 | 紫外通道 |
GFP/FITC | 转染示踪、蛋白表达 | 蓝色通道 |
RFP/TRITC | 骨架标记、双标共定位 | 绿色通道 |
实际配置按当前课题用得到的标记来。很多实验室先配GFP+DAPI两个通道，后续用到RFP时再加。分步骤升级，每一笔投入都对应真实实验需求。
四、相机要一起升级吗
荧光信号通常比明场暗，普通彩色相机在低光下噪点会比较明显。做荧光成像时，建议搭配高灵敏或制冷相机，弱信号也能拍出干净图像。如果只偶尔看荧光、不要求定量拍照，先加装荧光模块、用现有相机观察也是可以的。
图17 荧光通道下的细胞
五、升级后的观察流程
明场看分布→iPC相差看细胞状态→荧光通道看标记信号→三通道叠加确认共定位。同一台设备完成三种观察，数据可以直接在同一视野里对比，不必把样品挪来挪去。
·先相差对焦，再切荧光，避免在暗视野里找细胞
·荧光亮度从低到高调，防光漂白
·拍照参数固定，便于不同时间点对比
从明场相差到荧光成像，CKX53留出的不是一个固定终点，而是一条可以按节奏走的升级路径。先把日常观察做扎实，需要荧光时再模块化扩展，这是很多细胞实验室的实际成长方式。
图18 荧光一体平台
转载自 CSDN-专业IT技术社区
原文链接：https://blog.csdn.net/Laite_tech/article/details/170198843
